小鼠白細胞介素 4（IL-4）ELISA檢測試劑盒檢測原理

發(fā)布時間： 2023-10-16　　點擊次數(shù)： 291次

檢測原理

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠白細胞介素 4（IL-4）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠白細胞介素 4（IL-4）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑盒性能

1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：檢測濃度小于 1.0 pg/mL。

3. 檢測范圍：5 pg/mL - 160 pg/mL 。

4. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

5. 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10%、板間變異系數(shù)小于15%。